做好一個標(biāo)準(zhǔn)化PCR負(fù)壓實驗室——把控四大問題

　　一、PCR負(fù)壓實驗室核心問題——污染控制

　　PCR負(fù)壓實驗室布局分為污染區(qū)、半污染區(qū)、清理區(qū)三個區(qū)域。一般按照衛(wèi)生部的要求，做好設(shè)計布局的原則，做到每個實驗區(qū)獨立，實驗區(qū)方向單一，嚴(yán)格控制交叉污染。這也是PCR負(fù)壓實驗室的核心問題。

　　二、PCR負(fù)壓實驗室質(zhì)量問題——建材挑選

　　從以上污染控制的核心問題來看，PCR負(fù)壓實驗室建筑材料一定要挑選易清洗、易消毒、不易積塵的材料。PCR負(fù)壓實驗室墻壁、天花板和地板應(yīng)平整，不透水，耐化學(xué)品和消毒劑腐蝕。地板可以用PVC或者環(huán)氧地坪漆，防腐防滑，不允許鋪地毯。

　　三、PCR負(fù)壓實驗室功能區(qū)問題——功能區(qū)布局

　　PCR負(fù)壓實驗室一般分為試劑制備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)一區(qū)、純化區(qū)、擴增反應(yīng)二區(qū)和純化后區(qū)。制備區(qū)和實驗所需試劑的制備和包裝通過轉(zhuǎn)運窗口運送到制備區(qū)，嚴(yán)格遵守人員通道。準(zhǔn)備區(qū)，主要是樣品的保存，rnadna的提取和保存，rnadna加入擴增反應(yīng)管，RNA DNA合成的測定。擴增區(qū)，dna擴增，加入制備的dna模板和合成的cDNA制備的反應(yīng)混合物和主板反應(yīng)混合物也可以在擴增區(qū)進行。在巢式pcr測量中，一輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴增具有較高的污染危害，第二次加樣必須在該區(qū)域完成。擴增主要用于擴增產(chǎn)物的測定。該區(qū)域是擴增產(chǎn)物的主要污染源，需要避免通過該區(qū)域的物品或工作服帶出擴增產(chǎn)物。

　　四、PCR負(fù)壓實驗室氣流壓力問題——通風(fēng)系統(tǒng)

　　針對PCR負(fù)壓實驗室氣流壓力問題，雖然對PCR負(fù)壓實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求，但交叉污染是實驗室的核心問題。因此，為避免各實驗區(qū)交叉污染的可能，一般采用全送風(fēng)全排風(fēng)的氣流組織，嚴(yán)格控制送排風(fēng)比例，保證實驗區(qū)內(nèi)的壓力。對試劑儲存和制備區(qū)的氣流壓力控制沒有嚴(yán)格要求。擴增反應(yīng)混合物的制備和擴增區(qū)域中的壓力梯度相對于相鄰區(qū)域是負(fù)壓。為了減少氣溶膠造成的污染，有必要盡量減少這一地區(qū)的步行。擴增產(chǎn)物分析區(qū)是擴增產(chǎn)物污染的主要來源，因此該區(qū)域的壓力梯度將調(diào)整為負(fù)壓，以避免污染物的擴散。